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高效液相色譜儀中氣泡產(chǎn)生的原因和排除

高效液相色譜儀中氣泡產(chǎn)生的原因和排除

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高效液相色譜儀實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,不能有氣泡進(jìn)入系統(tǒng),影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,會(huì)出現(xiàn)雜峰。本文就來(lái)介紹一下高效液相色譜儀中氣泡產(chǎn)生的原因和排除。

一、溶劑混合產(chǎn)生:

溶劑混合時(shí),由于兩種液體熱力學(xué)體積的變化,會(huì)產(chǎn)生氣泡;混合時(shí)放熱或者吸熱易產(chǎn)生氣泡,比如:甲醇和水混合屬于放熱,乙腈和水混合屬于吸熱。通常用量筒混合后明顯看到體積的增減,而且有許多小氣泡產(chǎn)生,掛在瓶壁上,或者晃一下可以看到許多小氣泡存在液體中。

故障排除:對(duì)溶劑過(guò)濾,超聲脫氣,尤其是乙腈和水混合后,超聲脫氣時(shí)間要長(zhǎng)一些,也可以通過(guò)其他方法脫氣,例如安裝在線脫氣機(jī),充氮脫氣等。處理好的液體在使用過(guò)程中應(yīng)該保持室內(nèi)溫度恒定。

二、溶劑濾頭污染產(chǎn)生:

溶劑濾頭污染,導(dǎo)致泵在吸液過(guò)程中吸力不均勻而強(qiáng)制吸液從而產(chǎn)生微小的真空氣泡。此時(shí)會(huì)觀察到進(jìn)液管壁上分布許多很小的氣泡,有的在動(dòng)有的停留在管壁上,或者感覺(jué)流速比設(shè)定值小,壓力也不穩(wěn)。

故障排除:先觀察現(xiàn)象確認(rèn),再排除。 用5%-10%的稀硝酸浸泡過(guò)夜或者超聲處理數(shù)小時(shí),然后用純水浸泡過(guò)夜或者超聲處理,注意換水多處理幾次,洗掉酸的殘留,后用有機(jī)相甲醇浸泡處理或者超聲即可。若上述處理未果,需更換新的溶劑濾頭。

三、流動(dòng)相未排氣:

流動(dòng)相放好后,沒(méi)有排氣,就開(kāi)始運(yùn)行泵,易產(chǎn)生氣泡。

故障排除:放好流動(dòng)相后,打開(kāi)旁通閥,用注射器慢慢吸液,觀察進(jìn)液管無(wú)氣泡后再吸10ml將流路中的空氣驅(qū)趕干凈,旋緊旁通閥后再運(yùn)行泵,或者是打開(kāi)旁通閥大流速排液,觀察進(jìn)液管無(wú)氣泡后,再排氣2min將流路中的空氣驅(qū)趕干凈,旋緊旁通閥后再運(yùn)行泵。

四、高效液相色譜儀泵污染:

單向閥或者泵頭內(nèi)部污染。泵頭是壓力變化劇烈的地方,也是易產(chǎn)生氣泡的地方,泵頭靠負(fù)壓而吸液,而負(fù)壓必然使流動(dòng)相中的小氣泡長(zhǎng)大,當(dāng)泵腔變正壓時(shí),已長(zhǎng)大的氣泡未必能全部變小流入后續(xù)液路,則泵腔內(nèi)將積存氣泡,從而影響吸液精度。

故障排除:小心拆下泵頭,用甲醇超聲清洗單向閥以及內(nèi)部密封圈和泵頭整體,用棉花沾甲醇擦拭柱塞桿。必要時(shí)更換單向閥,密封圈,柱塞桿等。

五、進(jìn)樣時(shí)產(chǎn)生:

進(jìn)樣時(shí)帶入氣泡,吸樣時(shí)帶到進(jìn)樣針中氣泡

故障排除:在進(jìn)樣前,注意排出進(jìn)樣針里的空氣,將進(jìn)樣針頭垂直向上,用手指墊上濾紙摁住針頭處,往上推,氣泡很容易就上去了,排出即可。

六、色譜柱進(jìn)氣泡

故障排除:用純甲醇低流速(0.2-0.3ml/min)長(zhǎng)時(shí)間沖洗反相色譜柱,隨后可逐步加大流速,加到1ml/min,直至色譜柱壓力穩(wěn)定?;蛘吒鼡Q色譜柱。

七、高效液相色譜儀檢測(cè)器:

流通池是易積存氣泡的地方,其對(duì)基線影響較大,流動(dòng)相流入色譜柱后,壓力越來(lái)越小,微小氣泡將逐漸長(zhǎng)大,而流通池截面積相對(duì)較大,則氣泡在池內(nèi)易長(zhǎng)大,在無(wú)外壓的情況下,很難縮小到管路內(nèi)徑以下流出流通池,從而存在了池內(nèi),導(dǎo)致基線很亂。

故障排除:在廢液出口處加反壓調(diào)節(jié)器,為流通池提供一個(gè)背壓;其次是用手指堵廢液管出液端,眼看泵柱壓上升,松開(kāi),且同時(shí)看檢測(cè)器顯示屏上吸光度值的變化。如果池內(nèi)有氣泡,則手指堵廢液管,吸光度值將劇烈變化,當(dāng)手松開(kāi)后吸光度值再次大步上升,證明池內(nèi)有氣泡但沒(méi)有排掉,當(dāng)手指堵住和松開(kāi)廢液管時(shí),吸光度值基本不變時(shí),證明排氣泡成功,再觀察基線將穩(wěn)定.


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